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嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑链霉菌(Streptomyces alboniger)发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3′末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)，赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

CAS号	58-58-2
分子式	C22H29N7O5·2HCl
分子量	544.43g/mol
纯度	≥95%(HPLC)
外观	白色至米白色粉末
结构式

• 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅用于科研用途，禁止用于人身上。

• 建议使用浓度
  哺乳动物细胞：1～10μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。
  大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。
  注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
  
• 嘌呤霉素杀灭曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒转导为例)
  嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线(kill curve)。
  
  • Day 1：24孔板内以5～8×10⁴ cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。
    
  • Day 2：
    ①准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0～15μg/mL，至少5个梯度)；
    ②往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞。
    
  • Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
    
  • 根据细胞的生长状态，约2～3天更换新鲜的筛选培养基。
    
  • 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4～6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。
• 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
  等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
  
  • 细胞转染48h后，将细胞(原样或稀释)置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
    注：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
    
  • 每隔2～3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
    
  • 筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。
    注：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3～10天。
    
  • 转移和放置5～10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。